Визначення групи крові за стандартними. Методи визначення групи крові

Існує два методи:за стандартними сироватками (пряма реакція) та стандартними еритроцитами (зворотна реакція).

Визначення групи крові за стандартними сироватками

Для визначення групи крові за цією методикою визначається кров змішують із сироваткою вже відомих груп і за наявності або відсутності аглютинації судять про групу крові. Для визначення застосовують заздалегідь приготовлені «стандартні сироватки» крові (I), А(II), (III) двох різних серій для кожної групи. На предметне скло або фарфорову тарілку наносять по 2 краплі стандартних сироваток (попередньо олівцем на склі відзначають групу сироватки) попарно з кожної серії.

Сироватки обов'язково беруть різними піпетками. Палець досліджуваного хворого обробляють спиртом та виробляють укол спеціальною голкою-скарифікатором. Беруть 6 крапель крові (не більше шпилькової голівки кожна) і поміщають їх поруч на тарілку зі стандартними сироватками. Окремими скляними паличками перемішують кров та сироватки. Через 5 хв до сироваток додають по 1 краплі. фізіологічного розчину(Для виключення помилкової аглютинації).

Результати дослідження:

якщо аглютинація відсутня у всіх трьох парних краплях, то досліджувана кров належить до першої групи крові (I);

відсутність аглютинації із сироватками Про (I) і В(П) говорять про те, що група крові А (II);

за відсутності аглютинації із сироваткою групи крові В(III) та при аглютинації із сироватками О(I) та А(II) слід вважати, що група крові В(III);

аглютинація з усіма трьома сироватками означає приналежність крові до четвертої групи - АВ (IV).

Визначення групи крові за стандартними сироватками з двох серій виробляють, щоб уникнути помилок. При аглютинації з трьома сироватками – AB (IV) група крові – необхідно провести додаткове визначення із сироваткою AB (IV) групи крові, яка зберігається у спеціальній запаяній ампулі.

У сумнівних випадках дослідження повторюють з іншими серіями сироваток або визначають за допомогою стандартних еритроцитів.

Визначення групи крові за стандартними еритроцитами

На порцелянову тарілку наносять 3 краплі сироватки, приготовленої з крові реципієнта. До сироваток додають по шпильковій головці стандартних еритроцитів О (I), А (II) та В (III). Через 5 хв додають по одній краплі фізіологічного розчину.

Результати дослідження:

при негативній реакції зі стандартними еритроцитами О(I) та позитивною зі стандартними еритроцитами А(II) та В(III) – група крові перша;
при відсутності реакції аглютинації зі стандартними еритроцитами (I) і А (II) і позитивної з еритроцитами (III) група крові друга;
за відсутності реакції аглютинації зі стандартними еритроцитами Про (I) та В (III) та позитивною з еритроцитами А (II) група крові третя;
за відсутності реакції аглютинації з усіма стандартними еритроцитами група крові четверта.

"Хірургічні хвороби", С.М.Муратов

Кожній людині корисно запам'ятати свою групу крові. Це може несподівано стати в нагоді при надзвичайних ситуаціях. Недарма у військовослужбовців відзначається група крові на гімнастерці чи жетонах. Проблеми з тим, як визначити групу крові, немає. У великих лікувальних закладах займаються лабораторії. Але навіть у невеликих сільських амбулаторіях є стандартні набори для визначення групи, а провести аналіз вміють усі лікарі та середні медичні працівники. Самостійно робити це ні до чого, коли є спеціалісти.

Яку групу крові у дитини можна припустити за батьками. Наприклад, знаючи, що у батьків друга, третя чи четверта, не варто сподіватися, що дитина буде першою.

Подібні поради дають люди, які «живуть» в інтернеті та збирають будь-яку інформацію без розбору. Часом переінакшують її на свій лад.

Дійсно, є теорія харчування залежно від типу крові та спроби пов'язати з нею характер особистості. Але це розроблялося для підбору найбільш відповідного раціону, запобігання хворобам. Про зв'язок типу особи з номером крові навіть психологи перестали говорити.

Тим більше, не можна судити з улюблених страв чи схильності до лідерства про свою групу.

У домашніх умовах щось дізнатися краще з повноцінних статей, консультацій фахівців. Можливо, є медичні документи (амбулаторна карта, виписки зі стаціонару), у яких є відомості про вашу кров.

За бажанням донорів та пацієнтів стаціонарів у паспорт можна проставити друк із зазначенням цих відомостей.

Подібні нашивки застосовуються на армійській формі

Хто вигадав групи крові

Першовідкривачем чотирьох груп крові є австрійський учений і лікар К. Ландштейнер, який отримав Нобелівську премію з медицини в 1930 році. Відкриття дозволило запобігти смертельних наслідків через переливання, вивчати попередньо сумісність донорських ознак і реципієнта.

Суть запропонованої системи АВ0 полягає у наявності у людини та тварин антигенних структур на еритроцитах. Типових антитіл (гаммаглобулінів) до них у плазмі немає. Тому реакцію «антиген + антитіло» можна використовуватиме визначення.

Поширеність груп крові за національною ознакою

Склеювання еритроцитів відбувається під час зустрічі антигену зі своїм антитілом. Така реакція називається гемаглютинацією. Вона видно під час проведення аналізу як дрібних пластівців. Визначення групи крові ґрунтується на отриманні картини аглютинації з типовими сироватками.

Антигени еритроцитів типу "А" зв'язуються з антитілами "ά", відповідно "В" з "β". За складом крові виділено:

I, або 0 (?, ?) - на поверхні еритроцитів зовсім немає антигенів;
II, або А (β) – містять антиген А з антитілом β;
III, або В (ά) - є антиген типу В з антитілом ά;
IV, або АВ(00) - має обидва антигени, але не містить антитіл.

Антигени є у зародка людини вже в ембріональному періоді, а антитіла (аглютиніни) з'являються у сироватці новонароджених протягом першого місяця життя.

Стандартне визначення групи крові (простий метод)

Для проведення аналізу на групу крові потрібні еритроцити пацієнта (беруться із краплі крові) та стандартні сироватки, що містять відомі антигени.

Сироватки виготовляються з донорської крові на «Станціях переливання», мають термін придатності, вимагають дотримання умов зберігання. На ампулах зазначається номер серії. Для точного аналізу береться два набори сироваток різних серій. Це робиться з метою виключення помилок.

На плоскій тарілці двома рядами поміщають по великій краплині чотирьох сироваток (досить тільки III і II, але для контролю береться ще 1 і 1V). Різними скляними паличками (зручно користуватися очними піпетками) в краплі сироваток вносять досліджувану кров (співвідношення має вийти приблизно 1:10) і обережно помішують.

П'ять хвилин тарілку похитують, даючи можливість сироватка добре перемішатися з кров'ю.

Розшифровка результатів

Проходить 5 хвилин і можна оцінювати результати аналізу. У великих краплях сироватки настає просвітлення, в одних утворюються дрібні пластівці (реакція аглютинації), в інших їх немає. Тут можливі варіанти:

якщо аглютинації немає в обох пробах із сироватками III та II груп (+ контрольні 1 та 1V) – це перша група;
якщо згортання відзначається у всіх, крім ІІ – це вказує на другу групу;
за відсутності аглютинації лише з III сироваткою – встановлюється третя група крові;
якщо згортання відзначається у всіх пробах, включаючи 1V-контрольну - група четверта.

Коли сироватки розташовані в правильному порядку, на тарілці проставлені підписи, то легко орієнтуватися: де немає аглютинації, така і група.

Трапляється, коли склеювання видно неясно. Тоді аналіз переробляють, дрібну аглютинацію дивляться під мікроскопом.

Метод перехресної реакції

Для уточнення групи при невираженій аглютинації застосовують метод подвійної перехресної реакції зі стандартними еритроцитами. В даному випадку відомими є не сироватки, як у простому методіа еритроцити. У пацієнта кров набирають у пробірку, центрифугують та для дослідження піпеткою відкачують зверху сироватку.

Стандартні антисироватки

На плоску білу тарілку капають дві великі краплі сироватки від пацієнта. У них додаються стандартні еритроцити А (II) та В (III) груп крові. Поступово розмішують, похитують тарілку.

Результат оцінюється через 5 хвилин:

якщо аглютинація настала в обох краплях, група перша;
якщо немає в жодній пробі, група четверта;
якщо в одній із застосованих відомих еритроцитів, то група визначається за наявністю або відсутністю згортання в краплі.

Визначення групи цоліклонами

Цоліклони – це синтетичні замінники сироваток. Вони містять штучні замінники аглютинінів і β. Їх називають еритротестами «Цоліклон анти-А» (рожевого кольору) та «анти-В» (синього). Очікувана аглютинація відбувається між еритроцитами досліджуваної крові та аглютинінами цоліклонів.

Методика не потребує використання двох серій, вважається більш точною та надійною. Проведення та оцінка результатів такі ж, як у простому стандартному методі.

Особливість: четверта група АВ(IV) обов'язково підтверджується реакцією аглютинації зі специфічним цоліклоном «анти-АВ» та відсутністю неспецифічного склеювання еритроцитів в ізотонічному розчині хлориду натрію.

Експрес-методика за допомогою набору «Еріротест-группокарт»

Метод дозволяє визначити групу та резус фактор у лабораторії та польових умовах. До складу набору входить картка із лунками. На дно лунок вже нанесено висушені реагенти. Тут, крім "анти-А", "анти-В" та "анти-АВ" використовується "анти-D", який дає результат резус-фактора.

Можна використовувати кров у будь-якому вигляді, підійде з'єднання з консервантом та взята з пальця.

Перед дослідженням на картці записується прізвище пацієнта, у кожну лунку вноситься крапля води розчинення інгредієнтів. Потім окремими паличками до лунок з реактивами додають кров і злегка перемішують. Остаточний результат «читають» через три хвилини.

Група крові завжди перевіряється ще раз при необхідності переливання. Одночасно контролюють групову та індивідуальну сумісність. Адже насправді в крові людини виявлено набагато більше антигенних властивостей, ніж у системі АВ0. Просто вони у більшості населення виявляються слабо.

Але у пацієнта з тяжкими захворюваннями, що змінюють властивості крові та аллергізують організм, вони стають визначальними, вимагають зважати на наявність і рівень у крові. Тому знання пацієнтом власної групи додає впевненості у результаті дослідження.

Матеріали публікуються для ознайомлення і не є приписом до лікування! Рекомендуємо звернутися до лікаря-гематолога у вашому лікувальному закладі!

Група крові та резус-фактор – особливі білки, які визначають її індивідуальний характер, так само, як колір очей чи волосся у людини. Група та резус мають велике значення в медицині при лікуванні крововтрат, хвороб крові, а також впливають на формування організму, функціонування органів і навіть психологічні особливості людини.

Поняття про групу крові

Ще лікарі давнини намагалися заповнювати крововтрату шляхом переливання крові від людини людині і навіть тварин. Як правило, всі ці спроби мали сумний результат. І лише на початку ХХ століття австрійським ученим Карлом Ландштейнером були виявлені відмінності в групах крові у людей, які були особливими білками в еритроцитах — аглютиногенами, тобто викликають реакцію аглютинації — склеювання еритроцитів. Вона і була причиною загибелі хворих після переливання крові.

Встановлено 2 основних види аглютиногенів, які були умовно названі А та В. Склеювання еритроцитів, тобто несумісність крові, відбувається у випадку, якщо аглютиноген з'єднується з однойменним білком – аглютиніном, що міститься у плазмі крові, відповідно, а та b. Отже, у крові людини може бути однойменних білків, викликають склеювання еритроцитів, тобто якщо є аглютиноген А, то ній може бути аглютиніна а.

Виявлено також, що в крові можуть бути обидва аглютиногени - А і В, але тоді вона не містить жодного виду аглютинінів, і навпаки. Все це є ознаки, що визначають групу крові. Тому при поєднанні однойменних білків еритроцитів та плазми розвивається конфлікт за групою крові.

Види груп крові

На підставі цього відкриття у людей виділено 4 основні види групи крові:

1-а, що не містить аглютиногенів, але містить обидва аглютиніни а і b, це - найпоширеніша група крові, яку мають 45% населення планети;
2-а, що містить аглютиноген А та аглютинін b, визначається у 35% людей;
3-я, в якій є аглютиноген В і аглютиніна, її мають 13% людей;
4-а, що містить обидва аглютиноген А і В, і не містить аглютинінів, така група крові найрідкісніша, вона визначається лише у 7% населення.

У Росії її прийнято позначення групової належності крові за системою АВ0, тобто за вмістом у ній аглютиногенів. Відповідно до цього таблиця груп крові виглядає так:

Групова належність крові передається у спадок. Чи може змінитися група крові - на це запитання однозначна: не може. Хоча історії медицини відомий єдиний випадок, пов'язаний із генними мутаціями. Ген, що визначає групу крові, знаходиться у 9-й парі хромосомного набору людини.

Важливо! Судження у тому, яка група крові підходить всім, сьогодні втратило актуальність, як і, як і поняття універсального донора, тобто володаря 1-ї (нульової) групи крові. Відкрито безліч підвидів груп крові, і переливається лише одногрупна кров.

Резус-фактор: негативний та позитивний

Незважаючи на відкриття Ландштейнером груп крові, все ж таки продовжували мати місце трансфузійні реакції під час переливання. Вчений продовжував свої дослідження, і разом із своїми колегами Вінером і Левайном йому вдалося виявити ще один специфічний білок-антиген еритроцитів - резус-фактор. Спочатку він був виявлений у людиноподібної мавпи макакі-резус, звідки й отримав свою назву. Виявилося, що резус присутній і в крові більшості людей: у 85% населення цей антиген є, а у 15% відсутня, тобто у них негативний резус-фактор.

Особливість резус-антигена полягає в тому, що при попаданні в кров людей, що його не мають, він сприяє виробленню антирезус-антитіл. При повторному контакті з резус фактором ці антитіла дають важку гемолітичну реакцію, яка називається резус-конфліктом.

Важливо! Коли резус-фактор негативний - це не просто відсутність в еритроцитах резус-антигена. У крові можуть бути антирезусні антитіла, які могли утворитися під час контакту з резус-позитивною кров'ю. Тому обов'язковим є аналіз на наявність резус-антитіл.

Визначення групи крові та резус-фактора

Група крові та резус-фактор підлягають обов'язковому визначенню у таких випадках:

щодо переливання крові;
для пересадки кісткового мозку;
перед будь-якою операцією;
при вагітності;
при захворюваннях крові;
у новонароджених при гемолітичній жовтяниці (резус-несумісності з матір'ю).

Проте в ідеалі відомості про групову та резус-приналежність мають бути у кожної людини — як у дорослої, так і у дитини. Ніколи не можна виключити випадки тяжкої травми або гострого захворюванняколи може терміново знадобитися кров.

Визначення групи крові

Визначення групи крові проводиться спеціально одержаними моноклональними антитілами за системою АВ0, тобто аглютинінами сироватки, які дають склеювання еритроцитів при контакті з однойменними аглютиногенами.

Алгоритм визначення групи крові наступний:

Готують цоліклони (моноклональні антитіла) анти-А - ампули рожевого кольору, і анти-В - ампули синього кольору. Готують 2 чисті піпетки, скляні палички для змішування та предметні скла, одноразовий шприц на 5 мл для взяття крові, пробірку.
Виконують забір крові із вени.
На предметне скло або спеціальний маркований планшет наносять великою краплею цоліклонів (0,1 мл), до них підмішують окремими скляними паличками маленькі краплі досліджуваної крові (0,01 мл).
Спостерігають за результатом 3-5 хвилин. Крапля з примішаною кров'ю може бути гомогенною – реакція мінус (-), або випадають пластівці – реакція плюс або аглютинація (+). Оцінка результатів обов'язково проводиться лікарем. Варіанти дослідження визначення групи крові представлені у таблиці:

Визначення резус-фактора

Визначення резус-фактора виконується аналогічно до визначення групи крові, тобто за допомогою моноклонального антитіла сироватки до резус-антигену. На спеціальну чисту білу керамічну поверхню наносять велику краплю реагенту (цоліклону) і малу краплю щойно взятої крові в таких же пропорціях (10:1). Кров обережно змішують скляною паличкою з реагентом.

Визначення резус фактора цоліклонами займає менше часу, тому що реакція настає вже через 10-15 секунд. Однак необхідно витримати максимальний термін- 3 хвилини. Як і у разі визначення групи крові, пробірку з кров'ю направляють до лабораторії.

У медичній практиці сьогодні широко застосовують зручний та швидкий експрес-метод визначення групової приналежності та резус-фактору за допомогою сухих цоліклонів, які розводяться стерильною водою для ін'єкцій безпосередньо перед дослідженням. Метод називається «Ерітротест-группокарт», він дуже зручний як в умовах клінік, так і в екстремальних, і в польових умовах.

Характер та здоров'я людини за групою крові

Кров людини як його специфічна генетична ознака ще до кінця не вивчена. В останні роки вченими відкрито варіанти підгруп крові, розробляються нові технології визначення сумісності тощо.

Крові також приписується властивість впливати на здоров'я та характер її власника. І хоча це питання залишається спірним, все ж таки багаторічними спостереженнями помічені цікаві факти. Наприклад, японські дослідники вважають, що можна визначити характер людини за групою крові:

власники 1-ї групи крові - люди вольові, сильні, товариські та емоційні;
володарі 2-ї групи відрізняються терплячістю, скрупульозністю, завзятістю, працьовитістю;
представники 3-ї групи є творчими особистостями, але водночас надто вразливі, владні та примхливі;
люди з 4-ю групою крові живуть більше почуттями, відрізняються нерішучістю, часом невиправдано різання.

Що стосується здоров'я залежно від групи крові, то вважається, що воно є найміцнішим у більшості населення, тобто при 1-й групі. Особи з 2-ою групою схильні до хвороб серця та онкологічним захворюванням, для власників 3-ї групи характерний слабкий імунітет, низька стійкість до інфекцій та стресів, а представники 4-ї групи схильні до серцево-судинної патології, захворювання суглобів, раку.

У цій статті йтиметься про методи визначення групи крові за системою АВ0, а також про експрес-метод визначення резус-фактора.

Спочатку поговоримо про цілі визначення групи крові, а також історію вивчення цього питання. Інтерес до переливання крові зародився давно. Ще у Стародавньому Єгипті лікарі намагалися перелити її пораненим, хворим, вмираючим. В основному використовували як донори молодих тварин. Вважалося, що вони мають особливу природну силу і до того ж не схильні до пороків, як люди. Переливання від людини людині було найчастіше безуспішним. Причини цього набагато пізніше відкрив австрійський лікар Карл Ландштейнер. Він визначив, що у людини знаходяться різні антигени та антитіла, що утворюють особливу імунну систему.

В даний час виділено близько п'ятисот різних антигенів, але на практиці групи крові визначають системою АВ0.

За цією системою до складу крові входять:

аглютиногени А та В (антигени). Локалізація – еритроцити;
аглютинини альфа та бета (антитіла). Локалізація – сироватка.

Розташування їх у крові:

Антиген А разом із антитілами альфа;
Антиген разом з антитілами бета;
Тільки антитіла альфа та бета.

Одночасно однойменні антигени та антитіла перебувати не зможуть, оскільки їхня зустріч призводить до бурхливого прояву т.зв. реакції ізогемаглютинації, що призведе до гемолізу (руйнування) еритроцитів та інших патологічних реакцій.

Техніка визначення групи крові полягає у застосуванні знання цієї особливості.

1-а група: відсутні аглютиногени, у сироватці – аглютинини є;
2-я група: є А та бета;
3-я група: є В та альфа;
4-а група: є А, В, аглютинінів немає.

Техніка визначення

Техніка визначення групи крові за системою АВ0 заснована на візуальному спостереженні аглютинації.

Проводити дослідження потрібно при:

Запитайте лікаря клінічної лабораторної діагностики

Анна Поняєва. Закінчила нижегородську медичну академію (2007-2014) та Ординатуру з клініко-лабораторної діагностики (2014-2016).

Показання:необхідність переливання крові, підготовка до оперативного втручання.

Приготувати:стандартну тарілочку з поглибленнями; набір скляних паличок; ізотонічний розчин хлориду натрію; набір гемаглютинуючих сироваток 1,2,3,4 груп двох серій; піпетки; годинник; лотки; рукавички; ємності для відпрацьованого матеріалу; контейнери з розчинами, що дезінфікують.

Підготовка до маніпуляції:

Медична сестра повністю підготовлена для виконання маніпуляції: одягнена в костюм (халат), маску, рукавички, ковпак, змінне взуття.
Перевірити якість стандартних гемаглютинуючих сироваток за: колірним маркуванням, зовнішнім виглядом (світла, прозора); збереження упаковки, наявності правильно оформленої етикетки.
Підготувати все необхідне виконання маніпуляції.

Виконання маніпуляції:

на білу тарілочку, згідно з позначенням, послідовно нанести по одній краплі сироватки 1, 2, 3 груп двох серій. Кожну піпетку негайно опускати в ту ж ампулу (флакон), з яких вони були взяті;

за допомогою скляної палички нанести поруч із заглибленнями (6 заглиблень) по краплі досліджуваної крові. Крапля крові повинна бути в 10 разів менше краплі сироватки;

відзначити час і чистою, сухою скляною паличкою перемішати кров із сироваткою 1 гр., потім іншою паличкою 2 гр. і т.д. у всіх заглибленнях;

у міру настання аглютинації, але не раніше 3 хвилини, у ті краплі, в яких настала реакція аглютинації додати по одній краплі ізотонічного розчину хлориду натрію для виключення хибної аглютинації та продовжувати спостереження протягом 5 хвилин.

Оцінка результатів:

а) при позитивній реакції у суміші з'являються видимі окомдрібні зернятка, що складаються з еритроцитів, що склеїлися. Дрібні зерна зливаються у великі зерна, інколи ж у пластівці, сироватка у своїй – знебарвлюється;

б) при негативній реакції рідина залишається рівномірно забарвленою у рожевий колір;

в) можливі 4 комбінації позитивної та негативної реакції:

1. якщо аглютинації немає в жодному осередку, то кров I (0) групи.

2. якщо аглютинація у першому та третьому осередках, то кров II (А) групи.

3. якщо аглютинація у першій та другій групах, то кров III (В) групи.

4. якщо аглютинація у першому, другому, третьому осередках, то кров IV (АВ) групи.

Для виключення помилки перевіряють кров із сироваткою 4 групи, де аглютинації не повинно бути.

Закінчення маніпуляції:

Зняти рукавички, помістити в дезинфікуючий розчин.
Вимити руки, осушити рушником.

Примітка:визначення групи крові виробляється у приміщенні з хорошим освітленням за нормальної температури 15 – 25 0С.

Визначення груп крові за допомогою стандартних ізогемаглютинуючих сироваток

Оснащення:набір стандартних изогемагглютинирующих сироваток I-IV груп крові двох різних серій, білі фарфоровий або емальований планшет зі змочуваною поверхнею, на якому розташовано 8 (або 7) лунок, маркованих 0(I), А (II), B(III), AB( IV), 0,9% розчин хлориду натрію, піпетки, скляні палички.

Техніка виконання.Процедура проводиться в добре освітленому приміщенні за температури від 15 до 25 ºС. На планшет під відповідне маркування наносять сироватки I, II, III груп крові обсягом ~ 0,1 мл. Кров у хворого беруть із пальця або з вени і додають по ~ 0,01 мл (мала крапля) до сироватки. Кров та сироватка змішуються скляними паличками. Очікування реакції гемаглютинації 0,5-5 хвилин. У ті краплі, де відбулася аглютинація додають по 1 краплі ізотонічного розчину, після чого проводять облік результатів проби згідно з наведеною нижче схемою.

0(I)	А (II)	B(III)	AB (IV)	Група крові
-	-	Не проводять	0(I)
+	-	+	Не проводять	А (II)
+	-	Не проводять	B(III)
+	+	-	AB (IV)

Рис. 61. Схема обліку результатів проби щодо групи крові з допомогою набору стандартних сироваток. На схемі позначено: + аглютинація - аглютинація відсутня.

Звертаємо увагу, що проба із сироваткою IV групи (що не містить жодних аглютиногенів) проводиться тільки за наявності аглютинації у всіх трьох лунках на планшеті для підтвердження визначення IV групи шляхом виключення неспецифічної аглютинації.

Рис. 62. Зовнішній виглядемальованого планшета, що відповідає групі крові В(III).

Поняття про групи крові

Групи крові системи АВ0

Групи крові системи АВ0 були відкриті в 1900 році К. Ландштейнером, який змішуючи еритроцити одних осіб із сироваткою крові інших осіб, виявив, що при одних поєднаннях кров згортається, утворюючи пластівці (реакція аглютинації), а за інших немає. На підставі цих досліджень Ландштейнер розділив кров усіх людей на три групи: А, В та С. У 1907 році була виявлена ще одна група крові.

Було встановлено, що реакція аглютинації відбувається при склеюванні антигенів однієї групи крові (їх назвали аглютиногенами), які знаходяться в червоних кров'яних тільцях – еритроцитах з антитілами іншої групи (їх назвали аглютиніном), що знаходяться у плазмі – рідкій частині крові. Поділ крові за системою АВ0 на чотири групи заснований на тому, що кров може містити або не містити антигени (аглютиногени) А і В, а також антитіла (аглютиніни) α (альфа або анти-А) та β (бета або анти-Б) .

Перша група крові – 0 (I)

I група - не містить аглютиногенів (антигенів), але містить аглютинін (антитіла) α та β. Вона позначається 0(І). Так як ця група не містить сторонніх частинок (антигенів), її можна переливати всім людям. Людина з такою групою крові є універсальним донором.

Друга група крові А β (II)

ІІ група містить аглютиноген (антиген) А та аглютинін β (антитіла до аглютиногену В). Тому її можна переливати тільки тим групам, які не містять антиген - це I і II групи.

Третя група крові В (III)

III група містить аглютиноген (антиген) і аглютинін α (антитіла до аглютиногену А). Тому її можна переливати лише тим групам, які містять антиген А - це I і III групи.

Четверта група крові АВ0(IV)

IV група крові містить аглютиногени (антигени) А та В, але містить аглютинінів (антитіл). Тому її можна переливати лише тим, у кого така сама, четверта група крові. Але, оскільки в крові таких людей немає антитіл, здатних склеїтися з антитілами, що вводяться ззовні, то їм можна переливати кров будь-якої групи. Люди із четвертою групою крові є універсальними реципієнтами.

Групи крові за системою АВО

Методика визначення груп крові

Групова належність крові за системою АВО визначається за допомогою реакції аглютинації. В даний час існує три способи визначення груп крові за системою АВО:

За стандартними ізогемагглютинуючими сироватками;

За допомогою моноклональних антитіл (цоліклонів анти-А та анти-В).

Визначення груп крові за стандартними ізогемагглютинуючими сироватками.

Суть методу зводиться до виявлення в випробуваній крові групових антигенів А і за допомогою стандартних сироваток. Для цього використовується реакція аглютинації. Пробу потрібно робити в приміщенні з добрим освітленням при температурі 15-25 ° С.

Для проведення проби необхідні: - Стандартні изогемагглютинирующие сироватки груп О (I), А (II), В (III) та АВ (IV) двох різних серій. Сироватки для визначення груп крові виготовляють із донорської крові у спеціальних лабораторіях. Зберігаються сироватки у холодильнику за нормальної температури 4 - 8° З. Термін придатності сироватки вказують на етикетці. На етикетці також вказується титр (то максимальне розведення сироватки, при якому може наступити реакція аглютинації), який повинен бути не нижче 1: 32 (для сироватки (III) - не нижче 1:16 /32). Сироватка має бути прозорою, без ознак гниття. Стандартні сироватки для зручності підфарбовують у певний колір: (I) - безбарвна (сіра), А (II) - синя, В (III) - червона, АВ (IV) - яскраво-жовта. Ці кольори супроводжують всі етикетки на препаратах крові, що мають групову приналежність (кров, еритроцитна маса, плазма та ін).

Білі фарфорові або емальовані тарілки або інші пластинки зі змочуваною поверхнею, марковані відповідно до груп крові.

Ізотонічний розчин натрію хлориду.

Голки, піпетки, скляні палички (предметне скло).

Техніка проведення реакції.

1. Під відповідними позначеннями групи крові на тарілку (пластинку) наносять сироватку I, II, III груп обсягом 0,1 мл (одна велика крапля діаметром близько 1 див). Щоб уникнути помилок, наносять дві серії сироваток, оскільки одна із серій може мати низьку активність і не дати чіткої аглютинації. Таким чином, виходить 6 крапель, що утворюють два ряди по три краплі в наступному порядку зліва направо: 0 (I), А (II), (III).

2. Кров для досліджень беруть із пальця або з вени. Сухий скляною паличкою на пластину в 6 точок послідовно переносять 6 крапель досліджуваної крові величиною приблизно шпилькову голівку 0,01 мл (маленька крапля), кожну поруч із краплею стандартної сироватки. Причому кількість сироватки має вдесятеро перевищувати кількість досліджуваної крові. Потім їх обережно перемішують між собою скляними паличками із закругленими краями.

Можлива і більше проста методика: на тарілку наноситься одна велика крапля крові, потім її забирають звідти куточком предметного скла і переносять кожну краплю сироватки, акуратно перемішуючи з останньою. При цьому кров щоразу беруть чистим куточком скла, стежачи за тим, щоб краплі не змішувалися.

3. Змішавши краплі, тарілку періодично похитують. Аглютинація починається протягом перших 10-30 секунд. Але спостереження слід вести не менше 5 хвилин, тому що можлива пізніша аглютинація, наприклад з еритроцитами групи А 2 (II).

4. У ті краплі, де відбулася реакція, додають по одній краплі ізотонічного розчину натрію хлориду, після чого оцінюють результати реакції.

Реакція аглютинації може бути позитивною або негативною

При позитивній реакції протягом перших 10-30 секунд спостерігають у суміші видимі неозброєним оком дрібні червоні зернятка (аглютинати), що складаються зі склеєних еритроцитів. Дрібні зернятка поступово зливаються у більші зерна або навіть у пластівці неправильної форми. При негативній реакції крапля залишається рівномірно забарвленою у червоний колір.

Результати реакцій двох серій у краплях із сироваткою однієї й тієї ж групи мають співпадати.

Приналежність досліджуваної крові до відповідної групи визначають за наявністю чи відсутністю аглютинації при реакції з відповідними сироватками.

Якщо усі сироватки дали позитивну реакцію, отже, випробувана кров містить обидва аглютиногени - А та В. Але в таких випадках, щоб виключити неспецифічну реакцію аглютинації, слід провести додаткове контрольне дослідження випробуваної крові зі стандартною сироваткою групи АВ (IV).

Визначення груп крові моноклональними антитілами

Для визначення груп крові цим способом використовують моноклінальні антитіла, які отримують за допомогою гібридомної біотехнології.

Гібридому – це клітинний гібрид, утворений шляхом злиття клітини кісткового мозку (мієломи) з імунним лімфоцитом, який синтезує специфічні моноклональні антитіла. Гібридому має здатність до необмеженого зростання, характерна для пухлинної клітини та властивої лімфоциту здатністю синтезувати антитіла.

Розроблено стандартні реагенти-моноклональні антитіла (МКА): цоліклони анти-А та анти-В, що застосовуються для визначення аглютиногенів еритроцитів. Цоліклони являють собою ліофілізований порошок червоного (анти-А) та синього (анти-В) кольору, який розводять ізотоничним розчином хлориду натрію безпосередньо перед пробою.

Техніка проведення.

Цоліклони анти-А та анти-В наносять на білий планшет по одній великій краплі (0,1 мл) під відповідними написами: анти-А або анти-В. Поряд з краплями антитіл слід нанести по одній маленькій краплі крові, що досліджується. Після перемішування компонентів спостерігають реакцію аглютинації протягом 2-3 хвилин. Оцінка результатів дуже проста.

Визначення групової належності крові може супроводжуватися помилками, що ведуть до неправильного трактування результатів. Можна виділити три основні групи помилок: помилки, пов'язані з низькою якістюреагентів; технічні помилки; помилки, пов'язані з особливостями Схема оцінки результатів визначення груп крові за допомогою моноклональних антитіл (цоліклони анти-А та анти-В) досліджуваної крові. Перших двох можна уникнути, суворо дотримуючись описані вище вимоги до сироватці, умов проведення реакції та ін. своїми власними (аутоаглютинація), а еритроцити в той же час дають аглютинацію з усіма сироватками, навіть із сироваткою групи АВ. Подібне явище описано при ряді захворювань: хворобах крові, спленомегалії, цирозі печінки, інфекційних захворюванняхта ін. Описано також панаглютинацію та аутоаглютинацію у здорових людей.

Явище панаглютинації та аутоаглютинації спостерігається лише за кімнатної температури. Якщо визначення групової приналежності проводити за нормальної температури 37° З, вони зникають.

Потрібно суворо пам'ятати, що у всіх випадках нечіткого або сумнівного результату слід провести повторне визначення груп крові за допомогою стандартних сироваток інших серій, а також перехресним способом.

Стандарт дій медичної сестри щодо групи крові за системою АВО

На пластині для визначення групи крові зліва направо підписують групи сироваток 0 αß (I), Аß (II), Вα (III) та в куті ПІБ пацієнта.

В два ряди по три великі краплівідповідно підписам на пластинку зліва направо наносяться стандартні сироватки 0 αß (I), Аß (II), Вα (III) ( 0,1 мл). Кожна сироватка наноситься окремою піпеткою (частіше використовують піпетки).

Поруч із кожною краплею сироватки паличкою (або окремою піпеткою) наносять досліджувану кров по одній маленькій краплі. (0,01 мл).

Співвідношення "сироватка: кров"повинна бути 10:1.

(Орієнтовно крапля стандартної сироватки повинна бути рівна копійчаній монеті, крапелька крові = голівці кравецької шпильки)

Краплі ретельно перемішують паличками (кожну краплю – окремою паличкою, кутом предметного скла). Спостереження за перебігом реакції проводять при легкому похитуванні пластинки.

Після закінчення 3-х хвилин (але не раніше) в ті краплі, де настала аглютинація еритроцитів, для виключення хибної аглютинації додають по одній краплі (0,05 мл) ізотонічного розчину хлориду натріюта продовжують спостереження при похитуванні пластин. Після внесення фізіологічного розчину хибна аглютинація зникає, істинна залишається без зміни або посилюється.

- Загальний час спостереження реакції – 5 хвилин.

Дані оцінки результатів реакції зі стандартними ізогемагглютинуючими сироватками:

Аглютинація вважається істинною, коли в краплі з'являються червоні грудочки, а сироватка освітлюється і якщо після додавання до сироватки, змішаної з кров'ю, краплі фізрозчину, склеювання еритроцитів не зникає.

Негативним результат вважається у тому випадку, якщо крапля залишається гомогенно забарвленою і не містить зернят та грудочок.

При визначенні групи крові з 3 парами стандартних сироваток можливі 4 варіанти результатів:

1) ознак аглютинації не дає жодна з трьох пар стандартних сироваток - кров, що досліджується, належить до 0(I) групи;

2) аглютинації немає із сироваткою A(II) групи. У сироватках 0(I) та B(III) груп виявлено аглютинацію - досліджувану кров A(II) групи;

3 ) аглютинації немає із сироваткою B(III) групи. У сироватках 0(I) та A(II) груп - аглютинація. Кров – B(III) групи;

4) всі сироватки спричинили аглютинацію еритроцитів.

В останньому випадку для виключення неспецифічної аглютинабельності еритроцитів необхідно провести додаткове дослідження зі стандартною сироваткою AB(IV) групи. Лише за відсутності аглютинації для дослідження з сироваткою IV групи дозволяє віднести досліджувану кров до групи AB(IV).

2.Визначення груп крові з моноклональними антитілами (Цоліклонами анти-А та анти-В, анти-АВ).

Визначення груп крові з моноклональними антитілами (цоліклонами анти-А та анти-В, анти-АВ) проводитися звичайними методами виявлення антигенів еритроцитів: при масовому визначенні в установах служб крові-на планшетах або автоматичних системах, при індивідуальному –на білій порцеляновій або іншій пластині зі змочуваною поверхнею.

Стандартні реагенти - цоліклони анти-А та анти-В, анти-АВ отримані методом ліофільної сушки. Вони не є продуктами клітин людини і тому виключено контамінацію препаратів вірусами гепатиту та СНІДу (синдрому набутого імунодифіциту).

Цоліклони анти-А (рожевого кольору) та анти-В (синього кольору) випускаються у флаконах або ампулах по 20, 50, 100 та 200 доз.

Для кожного визначення групи крові достатньо застосовувати по одній серії цоліклонів анти-А та анти-В (через високу активність реагентів).

Визначення груп крові виконує лікар. Медсестра готує обладнання для виконання тестів:

Планшети стандартні

Штатив для пробірок із кров'ю донорів (реципієнтів)

Штатив для цоліклонів

Піпетки

Рукавички

Пісочний годинник на 5 хвилин

Журнал для реєстрації результатів

Місткості для дезінфекції використаних предметів.

На планшет або фарфорову пластинку цоліклони анти-А та анти-В наносять по одній великій краплі. (0,1мл)під відповідні написи: анти-А, анти-В.

Поряд із краплями антитіл наносять досліджувану кров по одній маленькій краплі, приблизно в 10 разів менше краплі антитіл (0,01мл).

При визначенні групи крові на планшеті антитіла та кров змішують ретельно вимитою сухою кулькою, похитуючи планшет.

При визначенні на фарфоровій пластинці кров і антитіла змішують скляною паличкою, яку попередньо промивають і витирають насухо.

Спостереження за перебігом реакції з цоліклонами проводять при легкому погойдуванні пластинки або планшета протягом не більше 5 хв.

Результат реакції у кожній краплі може бути позитивним чи негативним.

Позитивний результат виявляється у аглютинації еритроцитів.

При негативної реакції крапля залишається рівномірно забарвленої червоного кольору – аглютиногени у ній не виявлено.

Аглютинація цоліклонами анти-А та анти-В зазвичай настає в перші 3-5 сек.

Спостереження слід проводити 2-5 хвчерез можливість пізнішого наступу аглютинації з еритроцитами, що містять слабкі різновиди антигенів А і В.