Réaction de l'anneau du complément avec l'antigène nircovym. Réactions pliantes de l'immunodiagnostic

Storinka 33 z 91

Réaction du complément (RSK)
La préparation de l'antigène et de l'antigène du complément ne se superpose pas nécessairement à l'antigène. Tsé. dans le grand monde à porter aux microbes, qui montrent la force d'un complément lytique. Ceux qui voient dans de telles gouttes de complément peuvent être vus indirectement derrière une méthode supplémentaire, comme l'ont montré J. Bordet et S. Zhang. L'essence de la méthode est offensante. Avec l'interaction du système immunitaire avec antigène spécifique l'antigène est reconnu avec l'antigène, le complexe de l'antigène avec l'antigène s'établit, ce qui va lier le complément. Si l'antigène est inadéquat et que l'anticorps n'est pas lié au complément, l'enzyme sera perdue. Le processus de lier le complément avec une réaction positive de l'antigène avec l'antigène devient invisible. À cette fin, si le complément est lié, ou si le complément est perdu, à titre d'indicateur, le système hémolytique est introduit dans la réaction (syrovatka hémolytique - hémolyse et érythrocytes d'un bélier). La réaction de l'anneau du complément se déroule en deux phases : dans la première phase, jusqu'à ce que l'antigène et le complément soient atteints, dans l'autre phase, le système hémolytique est alimenté.
Même dans la première phase de la réaction jusqu'à ce que la réaction soit détectée, l'antigène spécifique de l'antigène antigène, puis le complément sera appliqué au complexe antigène + antigène, si le système hémolytique et l'hémolyse sont ajoutés, la réaction ne sera pas positive .
Il n'est pas possible de venger des anticorps spécifiques, c'est-à-dire E. L'antigène et les anticorps ne se manifestent pas un à un, alors que le complément dans la première phase de la réaction est trop mauvais et lorsque les systèmes hémolytiques négatifs de l'hémolyse sont réduits. ).
Réaction Bordet-Zhangu (complément de sonnerie de réaction), scho Volodya haute sensibilité, Nabula la grande valeur diagnostique... Le prix augmentait encore plus si Zhangu montrait que la réaction pouvait être vue non seulement avec des objets bactériens, mais aussi avec des extraits. La réaction de Borde-Zhangu stagne lors du diagnostic de morve, de gonorrhée et de malades. A. Wasserman, est allé aux idées de J. Bordet, ayant collé la réaction au complément pour le sérodiagnostic, la syphilis. Réaction Qia sucer pratique sous la forme d'une syphilis.
La réaction de sonnerie du complément est bloquée de deux manières :

1. Pour la détection d'anticorps spécifiques dans syrovattsi pour un antigène d'espèce supplémentaire. Par exemple, si vous essayez de préparer un antigène pour préparer une culture gonococcique, vous pouvez trouver des antigènes gonococciques chez une personne malade. En général, il faut guérir l'antigène dont la dose, qui sonne complémentaire, a été vicié pour un nombre important d'affections.
2. Pour désigner le type d'antigène derrière l'antigène supplémentaire, il faut se venger de l'antigène avant l'antigène chantant. Par exemple, pour l'aide d'un système immunitaire spécifique, il est possible d'identifier un bâton à une toux. Chez les cich vipads, les mères ont besoin d'un système immunitaire fort, dont le titre est la vidomie.

Réactions Ingredinti (pièces d'entrepôt). Pour la réaction de la connexion du complément, les éléments suivants sont nécessaires: ​​1) les érythrocytes d'un bélier, 2) le syrovatka hémolytique, 3) le complément, 4) l'antigène et 5) le syrovatka viprobuvanny.
1. Les érythrocytes sont reconnus à partir de la détection du sang d'un bélier. Pour qu'un bélier s'abrite de la veine jugulaire, sans avoir besoin du milieu, dans un bocal avec des billes de verre. Scatter avec un tronçon de 10 quilins. Passer à travers une gaze stérile, centrifuger et sécher le liquide. Trois fois voir les érythrocytes du surplus discernement physiologique centrifugeuses au chlorure de sodium avec un tronçon de 10-15 quilins. Pour la troisième centrifugation du siège, une suspension d'érythrocytes à 3 % est préparée pour l'admission. Lorsque vous obtenez un abri défibriné, vous pouvez vous y habituer pendant 6 à 8 jours.

Schéma de préparation de la dilution du syrovat hémolytique à partir de la dilution principale 1: 100

1. Les sirovatka hémolitiques se réveillent comme des lapins, immunisés par les érythrocytes de bélier. Le sirop hémolytique doit être mis dans un verre sec de l'Institut des préparations bactériennes. Sur l'étiquette de l'ampoule, le titre du syrovate et la durée d'adhérence sont indiqués.

Tableau 4
Schéma de titrage hémolytique

Le titre de syrovat hémolytique est appelé dilution limite її, en association avec 0,5 ml de 0,5 ml de suspension d'érythrocytes à 3% en présence de 0,5 ml de complément pendant longtemps à une température de 37°.
Le titre du syrovat hémolytique doit être basé sur le schéma offensif: pour préparer la dilution principale du vortex 1: 100 (0,1 ml du syrovat + 0,9 ml de solution physiologique), qui doit être utilisé pour la dilution (tableau 3 ).
Dans plusieurs tubes à essai, l'un après l'autre, ajouter 0,5 ml de la même dilution de syrovat hémolytique en le réparant au 1:1000, ajouter 0,5 ml de complément dilué 1:10 dans le tube à essai cutané, et 0,5 ml de 3 % suspension d'érythrocytes. Le titrage des syrovatos hémolytiques est effectué selon le schéma (tableau 4).
D'après le diagramme, on peut voir que la dose est administrée en 1 1500 jours dilués d'hémolyse (c'est-à-dire que la titration est de 1: 1500). Il faut prendre 3 fois moins de dilution (troisième titre) pour le dosage. Ainsi, par exemple, si le titre de syrovat hémolytique est de 1: 1500, le taux de dilution est de 1: 500 (c'est-à-dire que 0,1 ml de syrovat est de 49,9 ml de croissance physiologique).

1. Complément Complément de yak dans la réaction pour servir le syrovatka Cochons d'Inde(Їx complément maє le plus actif) Abo complément sec, qui est libéré par les instituts de préparations bactériologiques.

Ainsi, comme les étapes de l'activité du complément ne sont pas les mêmes pour tous les cobayes, il est nécessaire de se mettre à l'abri de certaines créatures et іtrimanі sirovaty zmіshuvati.
Le titre du complément signifie le persha, la dose minimale du complément, qui est la définition de l'érythrocyte. Si, par exemple, dans l'induction du schéma de titration, une hémolyse supplémentaire est placée dans l'échantillon, de sorte que 0,3 ml de complément doit être remplacé, et une hémolyse incomplète apparaît dans le test, qui doit remplacer 0,25 ml de complément, puis le titre du complément nécessite 0,3 ml en rose : 10. A titre de dose robotique d'un complément, le titre est prélevé, une augmentation de 20-25%, c'est-à-dire approximativement la même quantité de complément est prélevée, car il se déroule dans un test d'étirement excessif avec hémolyse.
Yak en cas de titrage des seringues hémolytiques, et en cas de titrage du complément, deux contrôles sont fixés (div. Tableau 5).

Schéma de titrage du complément sans antigène


Tableau 6
Schéma de titrage du complément en présence d'antigène

En outre, il est recommandé de titrer le complément également en présence d'antigène.
Le titrage du complément en présence de l'antigène est nécessaire en gouttes tranquilles, si l'antigène apporte le titre au complément (pouvoir anticomplémentaire à l'antigène). Le pouvoir de l'antigène lui-même peut résulter de la nature de l'antigène lui-même, ainsi que de la manière de sa préparation.

1. Antigène. Dans la réaction de fixation du complément, une variété d'antigènes se forme. Antigènes є culture de microbes agiles ou de tissus anormalement altérés anormalement normaux Les deux antigènes bactériens peuvent être utilisés sous forme de suspension de microbes sous forme physiologique, ainsi que d'extraits de microbes préparés par différentes méthodes (par exemple, antigène gonococcique antigénique, tuberculose alcoolique, etc.). Grâce aux bons pouvoirs antigéniques de la suspension microbienne de volodia, elle est martelée par des vapeurs de formol, ou elle est saupoudrée d'alcool. Pour la réaction, la suspension d'antigène doit être diluée selon la norme optique, qui doit être vengée. 1 milliard de microbes jusqu'à 1 ml, et prendre 0,5 ml au total.

A titre d'antigène, il est également possible de faire stagner des lizats microbiens dans de l'eau distillée ou des dégradations physiologiques, ou dans un obturateur (appareil de stripping), ou au moyen de miettes antiformantes.
Pour la réaction de prendre une telle dose d'antigène, car la réaction augmentera l'hémolyse avec les seringues, pour compenser toute hémolyse, mais il n'est pas possible d'attraper l'hémolyse par elle-même. Du fait que tous les antigènes microbiens adsorbent un peu de complément, avant titrage, ils sont convertis en pouvoir anticomplémentaire, et une dose de complément est prescrite, c'est-à-dire La valeur d'un tel dosage de l'antigène est violée selon le schéma (tableau 7).
Le tableau montre que dans cette application, la dose de dissolution de l'antigène devient 0,4 ml. Pour plus d'informations, prenez la moitié d'une telle dose, c'est-à-dire que la dose normale sera de 0,2 ml.

1. Viprobuvana sirovatka. Le syrovat d'une personne malade est retiré du caillot après 3 à 48 ans après avoir prélevé du sang et l'avoir inactivé dans un bain-marie à 56 ° pendant 30 minutes.

Tableau 7 Schéma d'attribution de la posologie à l'antigène

Les aliments inactivés peuvent être conservés au réfrigérateur pendant 5 à 6 jours. Pour la réaction, le syrovat d'un malade est stagnant en dilution 1:5 (0,1 ml de syrovat + 0,4 ml de rose physiologique).
Mise en place pour voir la réaction de l'anneau du complément (tableau 8).
Pour formuler la réaction du lien complémentaire, vous avez besoin des ingrédients suivants :

1. différences physiologiques (0,85 %) ;
2. sirovatka, scho pidlyagaє à la boue, est activé à 56 ° avec un tronçon de 30 piquants dans un bain-marie;
3. antigène (suspension de bactéries ou d'un extrait de celles-ci), qui ne se produit pas indépendamment de l'hémolyse, ni ne le prend à une dose établie par titrage;
4. complément à la dose de travail, établie pour la titration;
5. syrovatka hémolytique à une dose similaire au titre inférieur;
6. Suspension à 3 % d'érythrocytes de mouton.

Kozhen s Ingredіntіv, qui stagne pour la réaction, est pris dans une bouteille de 0,5 ml. Si la dose du composant okremogo est plus petite, elle doit être complétée par une dégradation physiologique jusqu'à 0,5 ml.
Le dosage principal du lien au complément doit être fixé immédiatement à partir de deux - trois antigènes préparés de manière différente (A1, A2, A3 dans le tableau 8).

Schéma des informations de base

Pour le contrôle, il faut immédiatement mettre une réaction dans exactement les mêmes esprits avec une réponse normale et positive, donnant probablement un résultat positif. Lors de la mise en scène d'une réaction, on peut réduire la quantité d'antigène et de complément. Brillant à 37° pendant un an. Lorsque le terme indiqué est terminé, la quantité de cellules hémolytiques et d'érythrocytes est ajoutée au tube à essai - le système hémolytique. Le système hémolytique est complété sans avoir besoin d'une préparation de taille moyenne de sommes de cellules sanguines hémolytiques et d'érythrocytes, par exemple, pour la préparation d'une somme de sommes dans des thermostats. La somme de tous les ingrédients du stockage d'énergie est mise dans un thermostat à 37° pendant 1 an, puis pendant 12 ans transférée au réfrigérateur ou à température ambiante.
Dans les tubes à essai, dans lesquels l'hémolyse est placée, l'âge devient clair, ale pofarbovanoi (div. Fig. 58).

Petit. 58. Schéma de la réaction de liaison du complément.
a - la réaction est positive ; b - la réaction est négative.

Le résultat de la réaction est signifié soit par les mots réaction "positive", "négative", soit par un signe plus (+) ou un moins (-). Si c'est le cas, les étapes de l'hémolyse peuvent être saupoudrées entre les intervalles de chaque point, jusqu'à ce qu'il soit même faible, ce qui signifie qu'il peut être en route :
(++ + +) - reconstitution de l'hémolyse; Ridina n'est pas cultivé, siège important d'érythrocytes;
(+++) -Hémolyse clairement couvrante; rіdina zabarvlena, siège des érythrocytes;
(++) - couverture partielle de l'hémolyse ; Ridina est intensément durci; siège compact des érythrocytes;
(+) - l'hémolyse est même faiblement couverte ; rіdina barrée de manière intensive, le siège n'est pas grand ;
(±) -Si l'hémolyse est rattrapée, s'il y a un léger siège ;
(-) - hémolyse secondaire (réaction négative).

(RSK) Proposé par J. borde O. Zhangu... La réaction comprend deux phases (Fig. 10-18).

Réactions de phase I (spécifiques) de la persistance du complément (RSK) shukaniy Ar (abo AT) réagit avec le diagnostic antisirovatki (abo Ag-diagnostics) et le complément. Complexe d'affirmations Ag-AT pov'yazuє complément.

Réaction de phase II (indicateur) de la persistance du complément (RSK) Dans ce cas, la manifestation d'un complément viable introduit dans le milieu réactionnel du système hémolytique - les érythrocytes du bélier et le syruvate hémolytique - est évidente, de sorte que l'AT doit être remplacé avant eux. Si Ar et AT ne reconnaissent pas un pour un et n'établissent pas de complexes immuns, alors la sonnerie du complément ne sera pas reconnue. Dans tsyomu. Le complément de vilny interrelié avec les composants du système hémolytique, fixé sur le complexe AT érythrocytaire-antirétrocytaire. Le goût de cela - hémolyse des cellules indicatrices (phénomène de "sang de laque") - la réaction est négative.

Yaksho en phase I de réaction de liage du complément (RSK) AT et Ar voient un à un, alors le complexe immun est réglé pour lier un complément, ruinant les cellules sanguines pour l'introduction du système hémolytique et ne favorise pas et la réaction est positive. Les principaux défauts du RSK : le repliement (dont 5 composants), la labilité des composants [ils doivent être gotuvati juste avant la réaction (complément), pour quelques dib (cellules sanguines de bélier)] et il existe une possibilité de puissants anti-complément Protéger RSK stagner dans le diagnostic de la maladie de bagatoch, par exemple, dans le diagnostic de la syphilis (réaction de Wassermann).

RSK est largement utilisé pour diagnostic de laboratoire maladies vénériennes, rickettsioses, infections virales. Réaction contre deux phases. phase de persha- interaction de l'antigène et des anticorps pour la participation du complément de liaison. ami- révélant les résultats de la réaction pour le système hémolytique indicateur supplémentaire (érythrocytes de ram et syrovat hémolytique). Ruinuvannya erythrocytes hémolytique sirovatkoy sont pris seulement au moment de la fixation d'un complément au système hémolytique. Même si le complément a été adsorbé plus tôt sur le complexe antigène-antigène, l'hémolyse des érythrocytes ne se produit pas. En cas de manifestation sous antibiothérapie pré-juvénile, Complémentaire à l'antigène, le complexe antigène-antigène-anticorps pov'yazuє (adsorber) sur son propre complément est établi. Avec des systèmes hémolytiques ajoutés l'hémolyse ne se produit pas (couvrant l'hémolyse ) C'est pourquoi tout le complément de vittraction est sur le lien spécifique du complexe antigène-antigène, et les érythrocytes sont devenus sans importance. Quand il n'y a pas d'antivirus Complémentaire de l'antigène, le complexe antigène-antigène spécifique ne sera pas établi et le complément ne sera pas lié. A cela, avec l'adjonction de systèmes hémolytiques, le complément doit lui être apporté. Le résultat de la réaction dans ce vypadku sera hémolyse érythrocytes - dans des tubes à essai pour s'établir dans un abri dit "de laque".

Petit. 6. Schéma de RSK : une- le système indicateur (érythrocytes ram et anticorps avant eux) en présence de complément apparaît en présence d'hémolyse ; b- avec l'aide d'un malade, le diagnosticum (Ag) confirme le complexe immun et le complément actif, il en résulte une hémolyse ; v- en sirovatsі des gens formidables antityl nemaє, le complément est activé par le système indicateur, le résultat est l'hémolyse.

Réactions à la stase des hommes et des femmes

Les réactions aux tests de divers antigènes et antigènes constituent la base des méthodes de diagnostic express des maladies infectieuses, afin de détecter la plus petite quantité d'Ag et d'AT dans les études récentes. Yak mіtok peut être utilisé comme enzymes vikoristanі ізні, barvniks avec des fluorochromes et des isotopes.

Réaction d'immunofluorescence (RIF) La méthode danoise est expressive et très sensible. Voir deux rêves de yogo. à direct méthodes pour ajouter une suspension microbienne, fixée sur la plaque, pour ajouter un syrovat, marqué d'un fluorochrome. Complexe antigène-antigène pour éclairage par échanges ultraviolets (bleu-violet) oui bougies vert vif... à indirect RIF vikoristovuyut diagnostics extraordinaires contre tout type de microbes. Compléter la suspension microbienne à la suspension microbienne pour le complexe antigène-antigène. L'ensemble du complexe apparaît à l'aide d'un sérum fluorescent universel, pour venger les anticorps contre la fraction gammaglobuline du sang de ce type de créature, comme une balle reconnue comme sérum de diagnostic. Le complexe évolue avec la microscopie à luminescence.

Petit. 7. Réaction d'immunofluorescence (schéma).

Test immuno-enzymatique (IFA) La base du dosage immuno-enzymatique est basée sur le type de réponse immunitaire de l'antigène et de l'anticorps. L'un des réactifs est le discours initial, et le second est la manière dont il est supposé être de la spécificité standard (vibration) selon la référence au discours résumé. Des complexes immuns (antigène-antigène) ont été établis pour la détection enzyme Le composant (antigène ou antigène) est étiqueté devant le devant. L'enzyme elle-même, naturellement, n'est pas visible, la visualisation de la présence de la parole, qui est initiée par la méthode IPA, atteint le milieu du milieu - chromogène... C'est particulièrement gai d'un spoluca, car il est bon d'être au bord de l'eau et c'est déséquilibré. Réincarnation d'un chromogène sans barre en discours de coloration chromophore pour chaque chromogène c'est un substrat.

Petit. 8. Analyse immunoenzymatique (schéma).

auto-antigène- les discours, comme peuvent être des réactions immunitaires victorieuses dans le corps, à cause de la puanteur du rejet. pour venger le cerveau, le kryshtalik de l'œil, les spermatozoïdes, les glandes parathyroïdes, les homogénats d'insectes, le shkiri, le nirok, le foie et d'autres tissus. Alors, dans les esprits méchants des auto-antigènes, ne venez pas à l'écluse systèmes immunitaires organisme, les anticorps dirigés contre certaines cellules et certains tissus ne peuvent être établis. Cependant, lorsque l'autoantigénicité tissulaire est regroupée, elle peut devenir humide et ne pas établir l'antigène, ce qui donnera une grande réponse à l'apparition des cellules. Des auto-antigènes peuvent également être trouvés dans les cellules sanguines et les tissus pour le refroidissement, les injections médicamenteuses, les infections virales, les bactéries bactériennes et les toxines, par exemple les bactéries streptocoques, les bactéries staphylocoques La puanteur est approuvée dans une grande variété de cas en raison de la détérioration de la spécificité spécifique des antigènes vlast dans le corps.

Les anticorps, étant des molécules de glucoprotéine pliables, sont également eux-mêmes des antigènes. Il existe trois types de déterminants antigéniques (élites) dans leurs entrepôts : les izotypes, les allotypes et les іdіotypes.

Les izotypes sont des déterminants, pour lesquels il existe des classes et des types de lances importantes et des options pour les poumons lambda et lambda.

Allotype - déterminant, qui est codé par les allèles du gène d'immunoglobuline donné.

Idiotypes - déterminants antigéniques, établis par les centres actifs des molécules d'anticorps.

Sur une petite partie de la classe IgG, la crise est proche de 75 % de la quantité de toutes les immunoglobulines dans le sang des humains.

La réaction de la liaison du complément (RSC) dans le fait que, lorsqu'un antigène et l'anticorps sont détectés, le complexe immun est formé, jusqu'à ce que le complément (C) soit attaché au complexe antigénique par le fragment Fc de l'anticorps, c'est-à-dire... Si le complexe antigène-antigène ne s'affirme pas, alors le complément sera perdu.

Une interaction spécifique entre AG et AT supervise le complément d'adsorption (liens). Les oscillations du processus de liage du complément n'apparaissant pas visuellement, J. Bordet et O. Zhangu ont proposé le système hémolytique (érythrocyte de ram + syrovat hémolytique), fixant le complexe AI-complément. Yaksho AG et AT correspondent à un à un, c'est-à-dire que si le complexe immun est établi, le complément est appelé complexe cyme et l'hémolyse ne se produit pas. Si AT ne montre pas AH, alors le complexe ne s'affirme pas et le complément, s'il est perdu, sera confondu avec un autre système et une hémolyse mèche.

réagir de manière excessive

Réaction contre deux phases pour la participation de deux systèmes ; bactérienne et hémolytique. Dans la première réaction (spécifique), participent antigène 4 + antigène + complément. Un résultat positif de la réaction, qui se produit lorsqu'il existe un antigène apparent à un antigène, se caractérise par l'affirmation d'un antigène complexe bactérien spécifique - antigène avec un complément adsorbé ou, semble-t-il, "lié". Surplombé invisible, le complexe n'est pas viclikak niyakikh zvnishnіkh zmin de ce milieu, dans yak_y vіn, ayant établi. Le résultat négatif de la RSC est faible en l'absence de spores spécifiques et d'antigène et d'antigène du sérum et se caractérise par une épargne du complément actif. La première phase du RSC peut être réalisée dans un thermostat à 37°C (1-2 h) ou dans un réfrigérateur à 3-4°C (18-20 ans). Avec une compréhension triviale du complexe immun antigène-anticorps dans le froid, il y a une plus grande réponse au complément et la sensibilité de la réaction devient plus prononcée. Lors de la mise en scène des illusions poreuses par l'immunologiste Radiansky, Acad. V. I. D'autre part, les savants ont montré que dans l'esprit d'un anneau trivial de complément dans le froid, il est possible d'attraper 100 à 500 fois moins d'antigène et de rejeter les résultats positifs en cas de grande reproduction du système immunitaire, sans la besoin d'une connexion de température. durée 1-2 heures. L'autre phase de la réaction (indicateur) est prise entre les réactifs du système hémolytique (somme de 3% de suspension des cellules sanguines et de l'acide hémolytique dans le liquide) à une température de 37°C avec présence d'une réaction complémentaire). Lorsqu'il n'y a pas de complément actif, l'hémolyse des érythrocytes n'est pas perfusée avec des hémolysines spécifiques (la réaction est positive).

Composants

Les réactions du complément (RSK) sont appelées réactions sérologiques de repliement. Pour la réalisation nécessaire 5 ingredієntіv, et lui-même : AG, AT et complément (système Persha), érythrocytes de bélier et syrovatka hémolytique (autre système).

L'antigène de la RSK peut être la culture de micro-organismes tués, de lysats, de composants de bactéries, d'organes pathologiquement changeants et normaux, de lipides tissulaires, de virus et de matériaux contenant des virus.

Yak pour compléter vikoristovyt sv_zhu ou cobaye sirovatka sec.

mécanisme de réaction

La RSK doit être réalisée en deux phases : 1ère phase - incubation de la somme, pour venger les trois composants antigène + antigène + complément ; Phase 2 (indicateur) - au sommet du complément en ajoutant à son système hémolytique, qui est stocké à partir des érythrocytes de bélier, et du sérum hémolytique, afin de venger les anticorps dirigés contre eux. Dans la 1ère phase de la réaction, lorsque le complexe antigène-antigène est établi, le complément est reçu, et dans la 2ème phase, l'hémolyse des érythrocytes sensibilisés à l'antigène n'est pas détectée ; la réaction est positive. Même si antigène et antigène n'apparaissent pas un à un (au sens pré-sensible de pas d'antigène ou d'antigène), le complément fera défaut dans la 2ème phase, pour arriver au complexe érythrocytes - anticorps anti-cytocytaires, anticorps vicieux ; la réaction est négative.

succion

La réponse complémentaire peut être utilisée pour :
1) détection d'anticorps spécifiques de nature non humaine sur la base d'une relation avec un antigène de nature spécifique ;
2) l'inoculation de la puissance de l'antigène dans la réaction avec un syrovatka spécifique. Préparation des ingrédients pour la production de RSK.

1. Le sang Syrovatku, prélevé pour l'avancement, avant la mise en place de la réaction est programmé dans un bain-marie à 56°C avec un allongement de 30 minutes pour l'activation du complément vlast. L'inactivation peut être conservée à des températures de 3 à 4 °C pendant 5 à 6 jours. Le jour de la mise en place, diluer la solution physiologique avec du chlorure de sodium dans un rapport de 1: 5 (0,1 ml de pré-jus, + 0,4 ml de chlorure de sodium isotonique).

2. L'antigène pour la production de DSC peut être des microbes, des bactéries et des extraits cultivés, éliminés des cultures microbiennes, des organes et des tissus pathologiquement modifiés et normaux. Les particularités de la préparation de l'antigène sont déterminées par la nature du processus infectieux et par les particularités de l'enfant.

3. complément є sum_sh de sirovatok, prélevé sur 3 à 5 cobayes sains, ou complément sec en ampoules.

Avant l'implantation, le cobaye doit être élevé avec un niveau physiologique de chlorure "atriya au taux de 1: 10, et le razchin principal doit être accepté.

4. Syrovatu hémolytique avant mise en scène pour activer les programmes à une température de 56°C pendant 30 minutes. Pour le réglage de la dose principale de RSK, ainsi que pour le titrage du complément et de l'antigène, la synoviale hémolytique est stockée au titre requis. Par exemple, si le titre de syrovatka hémolytique est de 1: 1800, la vitesse de réaction est de 1: 600.

5. Les érythrocytes otrimuyut du sang de bélier défibriné. Abri pour filtre vidalennya plyvok fibrinu à travers un filtre de gaze trisharovy. Le filtrat d'Otrimaniy est centrifugé, le syrovat est humidifié et versé, et il est rincé avec 3-4 centrifugeuses d'izotov - "avec un degré élevé de chlorure de sodium. Avec le reste de la promiscuité du bain d'érythrocytes, la boule surnageante de rіdini est coupable mais absolument discernable. A partir des érythrocytes, une suspension à 3 % est préparée dans du chlorure de sodium physiologique. Après avoir préparé le sens de la nourriture par la méthode d'ingredinti, comme nous participons au RSK, nous procédons avant de titrer le syrovat hémolytique, le complément et l'antigène.

La réaction de liage du complément (RSK) est basée sur le fait que le complexe antigène-antigène spécifique est adsorbé sur le complément (pov'yazuє).

La réaction est largement stagnante dans l'identification des antigènes et dans le sérodiagnostic des infections, notamment en cas d'infection par les spirochètes (réaction de Wasserman), le rachitisme et les virus.

RSK est une réaction sérologique pliable. Ils assument le rôle de complément et de deux systèmes et antigène - anticorps. Le jour, deux réactions sérologiques.

Le premier système concerne la formation d'antigène et d'antigène (une vidomie, innocente). À elle, je donne une quantité chantante de complément. En raison de l'antigène et de la réponse antigénique de l'ensemble du système, la puanteur se trouve et complète les sons. Ayant établi un complexe de dispersion sèche, il n'est pas visible.

À propos de la couverture du complexe, il faut connaître l'aide d'un autre système et hémolytique ou indicateur. Elle a un érythrocyte de bélier (antigène) et un syrovat hémolytique (antigène), c'est-à-dire un complexe immun Ready. Dans tout le système de lyse des érythrocytes, cela ne peut être qu'en présence d'un complément. Si le complément de pansements avec le premier système (s'il y a un changement d'antigène et d'anticorps), alors dans d'autres systèmes, l'hémolyse ne sera pas présente - car il n'y a pas de bon complément. Le taux d'hémolyse (au lieu que l'éprouvette soit calamiteuse, ou au fond du siège des érythrocytes), un résultat RSK positif doit être rétabli.

Même si dans le premier système l'antigène ne montre pas d'antigène, alors le complexe immun ne s'établit pas et le complément est perdu ! Dès que cela devient génial, le complément s'occupe du sort des autres systèmes, l'hémolyse est vicieuse, - le résultat de RSK est négatif (au lieu de probirok prozoro - "abri de laque").

Composants de la réaction du complément :

Antigène - lysat à lécher, extrait, haptène ; suspension plus ancienne.

1.Anticorps-sirovatka système malade
2. Complément - cobayes

3.Antigène - érythrocytes de bélier

4.Anticorps - hémolizine contre les érythrocytes du bélier

5.Rozchin izotonique

Je vais regarder ceux qui sont dans la RSK, s'occupant du sort d'un grand nombre de composants complexes, la puanteur est coupable avant d'être titrée et prise dans la réaction dans les nombres exacts et dans les cas habituels : 0,5 ou 0,25 chacun , jusqu'à 0,2 ml. Apparemment, tout le dosage doit être effectué au total 2,5, 1,25 ou 1,0 ml (les bons rapports donnent un résultat plus précis). Le titrage des composants de la réaction doit être effectué dans la même communication, dans laquelle mettre l'information, pour remplacer le composant manquant par une panne physiologique.

préparation des ingrédients

Syrovat hémolytique (hémolizine). Pour élever syrovatka 3 fois moins que le titre (div. P. 211). Préparez la dilution de syrovatki pour toutes les informations qui peuvent être obtenues en multipliant le volume de syrovatka dans un échantillon (par exemple, 0,5 ml) par le nombre de tubes à essai, les trochis modifieront le nombre de à l'admission.

2.Erіtrotsіty ram. Préparer une suspension à 3 % d'érythrocytes de bélier (div. P. 211) pour tout le nombre de tubes à essai de la dose. Pour la préparation du système hémolytique 30 minutes avant l'introduction de la quantité d'hémolysine diluée et de la suspension des cellules sanguines, ajouter le sirop aux cellules sanguines, puis rembobiner la quantité de 37.

3. Le complément est facile à reproduire 1:10. avant dosage cutané du titre yogo obov'yazkovo. Le titre de complément est le nombre le plus bas, lorsqu'il est ajouté au système hémolytique, une hémolyse supplémentaire se produit pendant 1 an à 37 . Le schéma de titration du complément est présenté dans le tableau 21.

Ouwaga ! Titrer un compliment de telle manière, dans lequel mettre l'information principale, pour substituer une panne physiologique dans la journée.

Oblik de résultats. Dans les contrôles, il est innocent d'induire des traces d'hémolyse, car dans l'un d'eux il n'y a pas de complément, dans l'autre - l'hémolysine. Contrôle pour indiquer la présence des composants dans la réaction d'hémotoxicité (capacité à lyser spontanément les érythrocytes).

Au point dans le tableau. 21 ajouter le titre au complément dilué de 1:10 à 0,15 ml. Pendant une heure pour expérimenter, l'activité du complément peut être réduite pour l'adsorption non spécifique des autres composants de la réaction, donc pour des raisons d'admission un certain nombre de compléments peuvent être augmentés : prendre une dose pour le titre. Tse est une dose de travail. Un mégot guidé a une livraison de 0,2 complément à une dilution de 1:10. Donc, comme tous les composants qui participent au RSK, sont coupables d'être pris en ryvnyh obsyagy (dans notre application, nous avons une livraison de 0: 5 ml), il faut ajouter 0,3 ml d'une rose ultra-fine à une dose de travail de complément (0,2 ml à 1:10). Pour tous les conseils des soins de leur part (complément et rose izotonique.

Pour toutes les informations sur la peau, multipliez-les par le nombre de tubes à essai, qui participeront au RSK. Par exemple, pour réaliser l'examen dans 50 tubes, il faut prendre 10 ml de complément 1:10 (0,2 mlx50) et 15 ml de rose isotonique (0,3 mlx50).

4. L'antigène est prêt à recevoir la préparation du titre donné, à la même quantité, si la dilution de l'antigène est coupable de vengeance dans 1 ml. par exemple, à un titre de 0,4 ème, diluer dans 0,96 ml de rose isotonique. Je prends une partie de l'antigène de la dose, qui correspond à la moitié du titre (0,5 ml). Tse il dose de travail. Il semble que l'antigène ait été dilué pour toute information en multipliant 0,5 ml par le nombre de tubes du test.

5. L'anticorps est une personne malade. Je svіzhu sirovatku avant d'être admis à agir, pour ajouter un complément à nіy. Pour l'ensemble її programmez 30 min à 56 au bain-marie ou dans un inactivateur avec thermostat. La voie restante est plus belle : il est possible de surchauffer la nourriture, c'est-à-dire qu'elle est dénaturée. Les dénaturations ne sont pas admissibles. Le Syrovat du malade devrait stagner en dilué de 1:10 à 1:160.

Tableau numéro 14

Les femmes immunisées sont le plus souvent utilisées par des esprits voyous et des activistes. Їх élever 1:50 vische.

Tous les composants sont préparés avec un petit surplus.

Tableau numéro 15

Réalisation de l'inspection principale

Une fois mis en scène, vous le verrez dans la région; la cohérence des composants supplémentaires est importante. Doslid doit être réalisé en deux phases.

Phase I. Au tube à essai, verser la quantité requise de chlorure de sodium isotonique, puis - l'entretien nécessaire du sirop dilué, et de la même manière, la dose de travail de l'antigène et du complément. Avant obov'yazkovo superviser le contrôle de tous et participer aux nouveaux Ingrédients : syrovatka, antigène, systèmes hémolytiques et complément.

Les éprouvettes sont rebroyées et incubées à 37°C 45 xv-1 an ou à 4°C ("RSC in the cold") 18 heures par heure. Réaliser une réaction « au froid » est important pour augmenter la sensibilité et la spécificité.

Phase II. Lorsque l'incubation est terminée, ajouter 1 ml du système hémolytique dans les tubes, qui sont vitrisés devant les thermostats pendant 30 minutes (sensibiliser). Les tubes à essai doivent être écrasés et remis dans le thermostat.

Résultat Oblik à propos de. Les tubes sont placés dans le thermostat pour hémolyse secondaire dans les 2ème, 3ème, 6ème et 7ème tubes à essai (contrôle du syvate, de l'antigène et du complément par une ou deux doses). D'abord pour toute hémolyse, elle est dans le 7ème test, dans lequel il y a une quantité subordonnée de complément. Afin de s'assurer que l'hémolyse se produit au cours du test, et en premier lieu nous pourrons le discerner, il est nécessaire de poursuivre particulièrement respectueusement ces contrôles. Yak seulement ridina dans les tubes à essai 2e, 3e et 6e regardé avec un aperçu, - a glissé de manière inexacte retirer le trépied des tubes à essai du thermostat. A propos de ceux qui n'ont pas été informés dans les thermostats plus, il n'est pas nécessaire, de parler de la manifestation de kalamut facile (hémolyse banale) au 5ème test - seulement la moitié de la dose de travail du complément et de l'hémolyse secondaire dans fabrication correcte Je ne peux pas te dire.

L'hémolyse dans le contrôle de l'échantillon et de l'antigène (tubes à essai 2 et 3) est appliquée à ceux qui les ont correctement dosés et en tant que tels, ne se lient pas à l'antigène du complément.

Dans le contrôle des systèmes hémolytiques (éprouvette 4) à її bon robot il est innocent d'induire une hémolyse - dans une nouvelle enzyme.

Après avoir traversé dans le fait que les commandes se sont déroulées correctement, il est possible de revenir à la porte. Le taux d'hémolyse dans les tubes à essai a été confirmé comme un résultat positif de la réaction. Il est nécessaire d'informer sur ceux contenus dans les anticorps syrovattsi є spécifiques de l'antigène prélevé. Les affirmations de ceux-ci ont un complexe de lier un complément et de basculer sur leur participation à la réaction d'hémolyse. Même dans les tubes à essai précédents, il y a une hémolyse, le résultat de la réaction est évalué comme négatif. Dans ce cas, il n'y a aucune preuve d'antigène ou d'anticorps, le complément ne se lie pas et participe à la réaction d'hémolyse.

En parallèle avec une personne malade, mettez le même dosage avec un syrovate positivement positif (c'est-à-dire avec un antigène, dans lequel il s'agit d'un antigène d'un antigène spécifique) et un syrovate positivement négatif, dans lequel il y a quelques antigènes spécifiques. Avec une mise en scène correcte du rapport, le premier problème est causé par l'hémolyse, et l'autre, par l'hémolyse.

L'intensité de la réaction est la suivante :

Povna chevauchant l'hémolyse. Les érythrocytes approuvent un kalamut rіvnomіrnu ou coulent au fond. Dans tout le vipadku rіdin in probіrtsі stє bezbarvnoy;

Lyse environ 25% des érythrocytes. Le siège est moins, la distance au-dessus est légèrement bandante. Le résultat de la RSK est également évalué comme extrêmement positif ;

Lyse environ 50 % des érythrocytes. Siège, Ridina Rozheva. Résultat positif de RSK ;

Lyse environ 75 % des érythrocytes. Un siège insignifiant, une énigme y fut intensivement barrée. résultat total RSK ;

Lyse tous les érythrocytes. Ridina est intensément barrée et absolument claire. Résultat RSK négatif.